• Primer nöron kültüründen esinlenen bir farklılaştırma
protokolü oluşturuldu.
• Önerilen protokol, uygun miktarda ve lokalizasyonda
nöronal belirteçleri sağladı.
• Protokol, olgun nöronlara benzeyen iyi farklılaşmış
SH-SY5Y hücreleri ortaya koydu.
Amaç: İnsan nöroblastoma hücre hattı SH-SY5Y, çeşitli nöropsikiyatrik
ve nörodejeneratif bozukluklarda sıklıkla kullanılan bir deneysel hücre
modelidir. Sonuçların in vivo nöronlarla tutarlı olması için SH-SY5Y’nin
nöron benzeri fenotipe tam olarak farklılaşmasını destekleyen bir kültür
protokolünün kullanılması çok önemlidir. Bununla birlikte, SH-SY5Y
hücreleri için standart hale gelmiş bir nöronal farklılaşma protokolü hâlâ
mevcut değildir. Literatürde çok sayıda farklılaşma yöntemi önerilmiş
olmasına rağmen nöronların en iyi şekilde temsil edilmesi için daha
güçlü nöronal özelliklere sahip SH-SY5Y hücreleri ve bu farklılaşmış
hücreler için daha uygun bir ortam gereklidir. Bu nedenle çalışmada,
nöronal olgunlaşmanın çok iyi tanımlandığı primer nöron kültürü
tekniğine dayanarak SH-SY5Y hücreleri için daha başarılı bir farklılaşma
protokolü oluşturmayı amaçladık.
Yöntem: Çalışmada, önceki SH-SY5Y farklılaşma protokollerini yeniden
düzenleyerek primer nöron kültürü protokolümüzle birleştirdik ve SHSY5Y
hücrelerinin farklılaşması için sağlam ve tekrarlanabilir bir protokol
oluşturduk.
Bulgular: Önerdiğimiz “retinoik asit+beyin kökenli nörotrofik faktör
(RA+BDNF)-aracılı 7 günlük farklılaştırma (4. günde conalbumin-)
protokolü, olgun nöronlara benzeyen şekilde iyi gelişmiş nöritler ile
birlikte nöronal ve sinaptik belirteçlerin yeterli miktarda ekspresyonunu
ve uygun lokalizasyonunu sağlamıştır.
Sonuç: Sunduğumuz farklılaşma protokolü, araştırmacıların her bir
bağımsız deneyde tatmin edici ve düzgün bir şekilde farklılaşmış SHSY5Y
hücresi elde etmesini sağlayarak in vivo’ya en yakın muhtemel
sonuca ulaşmasını sağlayabilir.
Anahtar Sözcükler: Farklılaştırma, nöroblastoma farklılaştırması, nöron
benzeri hücreler, SH-SY5Y